PVDF膜和NC膜作为Western印迹应用中最常用的两种类型的膜，各有什么特点？我们该如何选择？

印迹所使用的膜的类型可能影响下列因素：

•蛋白质结合能力

•是否需要用醇预湿

•开展多次剥离(stripping)和再生检测(reprobing)实验的能力

•蛋白质观察

•长期印迹保存

•信噪比

聚偏二氟乙烯(PVDF)和硝酸纤维素是Western印迹应用中最常用的两种类型的膜。

与硝酸纤维素膜相比，电转到PVDF膜上有许多优点。PVDF膜可提供更好的蛋白质截留率、物理强度和广泛的化学兼容性(Pluskal等，1986)。其中更高的机械强度和出色的耐化学性让PVDF膜成为免疫检测中各种染色应用和二次检测的理想选择。使用PVDF膜的另一个优点是，单块凝胶上的平行重复泳道可用于各种应用中，如考马斯蓝染色，接着切割条带进行N端测序，蛋白质水解/肽段分离/内部测序，以及免疫检测(Kurien等，2003)。市售的硝酸纤维素膜的典型结合能力是80 �C 100 μg/cm

2

，而PVDF膜的结合能力是100 �C 200 μg/cm

2

。

在检测血清中人免疫缺陷病毒(HIV)时直接比较PVDF和硝酸纤维素膜，结果表明，PVDF膜有着更好的总体HIV抗原截留率，并且有助于改善提高抗体对糖基化包膜抗原的检测(Lauritzen和 Pluskal，1998)。硝酸纤维素膜和PVDF膜的特性比较详见表1。

表1. PVDF和硝酸纤维素膜特性及应用的比较

特性/应用

硝酸纤维素

PVDF

物理强度

差

好

蛋白质结合能力

80 �C 100 μg/cm

2

100 �C 300 μg/cm

2

耐溶剂性

否

是

Western转移

是

是

总蛋白染料

胶体金

胶体金

丽春红

丽春红

氨基黑

氨基黑

印度墨汁

印度墨汁

Sypro

®

印迹染料

考马斯蓝染料

检测

显色

显色

化学发光

化学发光

荧光

荧光

放射性

化学荧光

放射性

双印迹方法

否

是

快速免疫检测

否

是

Western再次杂交

是

是

Edman测序

否

是

氨基酸分析

是

是

SDS存在下的结合

差

好

膜上消化或质谱分析

否

是

直接MALDI

-

TOF MS分析

否

是

数据可存档

否

是

默克密理博提供四种PVDF膜：

• Immobilon®-P膜(0.45 μm)是一种通用的基质，适用于一般的免疫印迹应用。

• Immobilon®-PSQ膜(0.2 μm)适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。

• Immobilon®-FL膜(0.45 μm)是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。

• Immobilon®-E膜(0.45 μm)是第一个用于蛋白质印迹的PVDF膜，可以用水性转移缓冲液润湿。这省去了其他PVDF膜所需的酒精预湿步骤。

Immobilon®转印膜以卷膜和方片膜形式提供。预切好的膜与所有预制胶以及大部分市售的凝胶电泳系统兼容。Immobilon®转印膜的性质详见表2。表3....