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石蜡包埋DNA样本修复试剂

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石蜡包埋DNA样本修复试剂


背景[1-6]

石蜡包埋DNA样本修复试剂是针对FFPE样本而设计的修复试剂,可修复低质量FFPE样本不同程度的损伤,提高文库产量及测序质量。石蜡包埋DNA样本修复试剂可修复5 ng-1μg Fragmented FFPE DNA。世界上绝大多数的组织样品是使用福尔马林固定或石蜡包埋(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded,FFPE)的方法处理的。要想提取出其中的核酸信息,相当有难度,因为FFPE样品中的DNA和RNA已经部分降解了,且DNA往往与组蛋白紧密交联。从福尔马林货石蜡包埋组织中提取核酸,是病理、法医等学科从分子水平上进行研究的基础。

根据不同的石蜡包埋方式,有两种提取方法:FFPE DNA Kit/石蜡包埋组织DNA提取试剂盒与GBCquick FFPE DNA Kit/石蜡包埋组织DNA快速提取试剂盒,现就各自的特点介绍如下:

FFPE DNA Kit/石蜡包埋组织DNA提取试剂盒采用传统的二甲苯的脱蜡方式来操作的,预先脱蜡后按组织DNA提取方法进行后续操作,主要包括SDS/蛋白酶K的消化蛋白,之后再加入胍盐与无水乙醇后过柱特定吸附核酸,经简单的洗涤之后,洗脱出高质量的DNA。该方法的优点是经典可靠,为许多公司的试剂盒采用,;本方法的缺点是要接触有毒的二甲苯,而且在二甲苯预处理的过程中可能会把一些潜在的病毒、细菌等除去,如果要获得病原菌的核酸信息可能不是最理想的纯化方式。

GBCquick FFPE DNA Kit采用的独特的脱蜡剂,操作过程中无需预先脱蜡,把脱蜡与组织的消化裂解结合在一起,这样既简化了操作的步骤,也能把潜在的病毒、细菌等病原微生物的核酸完全纯化下来。而且,采用的独特脱蜡剂是无毒无臭的,作为最新的操作方式而逐渐为广大用户采用。

不论是FFPE DNA Kit还是GBCquick FFPE DNA Kit操作的重点在于在过柱吸附之前组织必须要完全溶解,如果组织还没有完全溶解的话,就要继续消化。最后结果应该是表面光滑的半透明溶液,看不到任何微粒。孵育时间也取决于组织。例如,低密度组织(肺)所需的孵育时间就比高密度组织(心脏)少。有些样品、甚至连续消化3-5天才能获得比较高的产量。

在临床和分子生物学研究中,新鲜组织样本往往难以获得,甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)是目前最常用的人类病历档案标本。石蜡包埋组织被广泛应用于疾病诊断、法医鉴定、科学研究等方面。....


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