Western Blot实验中经常提到的一个名称――内参。内参即内部参照，一般是指由管家基因编码表达的蛋白，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。

内参的作用很多，其可以确保所有样本的上样量一致，可以作为校正蛋白样品定量以及上样过程中的误差，保证实验结果的准确性，也可以作为空白对照，检测WB过程中蛋白转膜是否完全以及发光显色体系是否正常。

那么在内参的选择上面我们应该注意什么呢？

根据不同的种属，

比如哺乳动物通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH；植物来源实验样本，则可以选择Plant actin、Rubisco等。

根据蛋白大小选择，

一般要选择目的蛋白与内参分子量相差至少5kD以上，才便于对结果分析。且当研究的蛋白的分子量与内参接近时，需要选择分子量与目的蛋白的分子量差距比较大的蛋白。常用内参蛋白的分子量大小见表1。

表1. 不同来源的蛋白对应的常用的内参蛋白

样本类型

常用的内参蛋白

分子量大小(kDa)

全细胞蛋白

β-actin

43

β-tubulin

55

Cyclophilin A

55

GAPDH

37

α-actin

43

α-tubulin

55

Cyclophilin A

18

Vinculin

116....